Utrata niedopasowanego HLA w białaczce po transplantacji komórek macierzystych cd

(Szczegóły tych metod znajdują się w dodatkowym dodatku.) W przypadku pacjentów 7, 16 i 43 wykonano mapowanie z krótkim tandem-powtórzeniem i analizę SNP na oczyszczonych błonach białaczkowych FACS, podczas gdy dla pacjentów 13 i 33 tylko próbki kości Dostępny był aspirat szpiku zawierający wybuchy białaczkowe. In Vitro Ocena efektu przeszczepu przeciw wadzie białaczkowej
Przy użyciu wirowania Ficoll-Hypaque rozdzieliliśmy jednojądrzaste komórki krwi obwodowej uzyskane od dawcy komórek macierzystych dla Pacjenta 16, od Pacjenta 16, 85 dni po pierwszym przeszczepie krwiotwórczych komórek macierzystych i 96 dni po drugim przeszczepie, oraz od zdrowego niedopasowanego obiektu HLA. Dla komórek uzyskanych w każdym z tych warunków użyto 5 x 105 komórek i wysiano z 5 x 105 napromienionych jednojądrzastych komórek (dawka promieniowania, 3000 rad) pobranych od Pacjenta 16 w momencie rozpoznania białaczki (30% blastów) w dniu. ml zmodyfikowanej pożywki Dulbecco w Iscove, uzupełnionej 10% ludzką surowicą i 300 IU na mililitr rekombinowanej ludzkiej interleukiny-2. Nowe pożywki dodawano do hodowli co 2 do 3 dni, a komórki odpowiedzi były ponownie nawiązywane z oryginalnymi komórkami stymulacyjnymi w stosunku 1: co 10 dni. Funkcję komórek odpowiadających z mieszanej hodowli limfocytów badano po każdej stymulacji za pomocą testów uwalniania 51Cr, enzymatycznego immunospot (ELISpot) i [3H] tymidyny (szczegóły patrz Suplement Uzupełniający); komórkami docelowymi były blasty białaczkowe uzyskane od Pacjenta 16 w momencie diagnozy lub gdy udokumentowano utratę specyficznego dla pacjenta haplotypu HLA.
Wyniki
Obserwacje kliniczne
Ryc. 1. Ryc. 1. Identyfikacja zmutowanych wariantów komórek białaczkowych niewykrywanych przez analizę chimeryzmu za pomocą typowania HLA. Słupki pokazują odsetek białek blastycznych w próbkach szpiku kostnego każdego z pięciu pacjentów, u których wykryto zmutowane warianty białaczki. Gwiazdki oznaczają próbki niedostępne lub niediagnostyczne. Wykresy kołowe powyżej wykresów pokazują procent chimeryzmu w odpowiednich próbkach aspiratu szpiku kostnego, oznaczanych przez genomowe typowanie HLA (górny rząd) lub krótko-powtórzone (STR) wzmocnienie (dolny rząd). Pięciu pacjentów miało remisję po przeszczepieniu krwiotwórczych komórek macierzystych (HSCT) i otrzymaniu dużej dawki komórek T dawcy (mediana dawki, 246 x 106 komórek CD3 + na kilogram masy ciała, zakres, 90 x 106 do 583 x 106) . Po przeszczepie u wszystkich pięciu pacjentów wystąpił nawrót, który nie został wykryty przy użyciu typowania HLA (czerwone skrzynki). W przypadku pacjentów 13, 33 i 43 zmutowane warianty udokumentowano podczas pierwszego i jedynego nawrotu po przeszczepie. W przypadku pacjentów 7 i 16, pierwszy nawrót, wykryty za pomocą krótkiej amplifikacji powtórzeń tandemowych i typowania HLA, został przekształcony w remisję po drugim haploidentycznym transplantowaniu od pierwotnego dawcy. Po tym nastąpił drugi nawrót, który nie został wykryty przez typowanie HLA.
Tabela 1. Tabela 1. Charakterystyka pacjentów, u których udokumentowano utratę specyficznego dla pacjenta haplotypu HLA. Badania chimeryzmu krwiotwórczego dawcy-gospodarza przeprowadzono co miesiąc po przeszczepieniu u wszystkich 43 pacjentów z zastosowaniem krótkiej amplifikacji typu tandem-replikacja i typowania HLA w celu ponownego pojawienia się hematopoezy gospodarza w szpiku kostnym, która często przewiduje nawrót choroby. .20 Wśród 43 pacjentów 17 pacjentów – z których 14 miało przeszczepy, gdy mieli uporczywą chorobę – miało nawrót białaczki
[podobne: hipertonia, sanmed, implanty zębów poznań ]

Powiązane tematy z artykułem: hipertonia implanty zębów poznań sanmed